技術(shù)背景

細(xì)胞內(nèi)的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白 (nucleoprotein)。其中真核生物的DNA又有染色體DNA與細(xì)胞器DNA之分。前者位于細(xì)胞核內(nèi)，約占95%，為雙鏈線性分子；后者存在于線粒體或葉綠體等細(xì)胞器內(nèi)，約占5%，為雙鏈環(huán)狀分子。除此之外，在原核生物中還有雙鏈環(huán)狀的質(zhì)粒DNA；在非細(xì)胞型的病毒顆粒內(nèi)，DNA 的存在形式多種多樣，有雙鏈環(huán)狀，單鏈環(huán)狀，雙鏈線狀和單鏈線狀之分。RNA是以DNA的一條鏈為模板，通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中，tRNA攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基，與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合，而后rRNA將各個(gè)氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。相對(duì)來講，RNA分子比DNA分子要小很多，其種類，大小結(jié)構(gòu)和功能均更加多樣化。

提取純化產(chǎn)品冊

大多數(shù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都是從核酸的分離純化開始，進(jìn)而展開下游的實(shí)驗(yàn)，如 RT-PCR、qPCR 及酶促反應(yīng)等等。核酸的純度、產(chǎn)量、質(zhì)量都會(huì)直接影響下游實(shí)驗(yàn)。因此，有效地去除各種雜質(zhì)殘留和污染，并保證核酸的完整性，是完成下游實(shí)驗(yàn)最基本的條件，這也說明了核酸的分離純化在分子生物學(xué)中的重要地位。核酸分離與純化的方法很多，應(yīng)根據(jù)具體生物材料的性質(zhì)與起始量，以及分離核酸的性質(zhì)與用途而采取不同的方案。

目前，常見的核酸抽提純化方法主要三類：

溶液型的抽提方法：（酚CHCL3抽提、鹽析等）

柱式抽提方法：（離子交換、硅膠柱等）

磁珠純化方法

選購指南

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護(hù)新鮮組織RNA完整性的保存劑(R501)    

產(chǎn)品概述    

RNA Keeper Tissue Stabilizer是一種無毒的溶液，可迅速滲入組織內(nèi)部，滅活內(nèi)源RNase，立即穩(wěn)定并保護(hù)RNA的完整性。新鮮的組織樣本無需液氮速凍，只要浸入RNA Keeper Tissue Stabilizer中，即可在37°C保存1天，室溫保存1周，4°C保存4周或在-20°C/-80°C長期保存，且反復(fù)凍融不會(huì)顯著影響RNA的完整性。RNA Keeper Tissue Stabilizer中存放的樣本可直接使用 RNA isolater總RNA提取試劑(Vazyme #R401)、(Vazyme #R701)或離心柱法 (Vazyme #RC101)提取RNA。RNA Keeper Tissue Stabilizer可用于腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、肌肉等軟性組織的保存，不適用于表面有蠟質(zhì)或硬殼類的生物體樣本保存。

性能展示

將小鼠肝臟組織(1)和脾臟組織(2)保存在RNA Keeper中，分別在37℃放置1天，室溫放置1周，4℃放置4周后，用RNA isolater (Vazyme #R401)提取總RNA。電泳結(jié)果表明，28S、18S、5S條帶均清晰可見，說明RNA具有很好的RNA Keeper Tissue Stasilizer可有效保證樣本中RNA不被降解且樣本可在RNA Keeper Tissue Stasilizer中穩(wěn)定儲(chǔ)存。
                               

操作流程概要

適用范圍

動(dòng)物組織 / 細(xì)胞

組分

操作流程
1.樣品處理

①動(dòng)物組織：把動(dòng)物組織切成0.5 cm左右見方的組織塊，加入5倍體積的RNA Keeper。

②培養(yǎng)細(xì)胞：按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法收集細(xì)胞，用PBS 清洗后加入5-10倍體積的RNAKeeper。

③酵母：收集大約10⁸個(gè)細(xì)胞(12,000 g，2 min)，棄上清。加入 0.5~1 ml的RNAKeeper。長期保存時(shí)應(yīng)將酵母細(xì)胞置于RNA Keeper中，室溫或4℃放置1小時(shí)，

然后離心收集細(xì)胞(12,000 g，5 min)，棄上清，再置于-80℃保存。

△只適用于較柔軟的植物組織，如嫩葉、嫩莖等；如果植物組織表面有蠟，則RNA Keeper不能充分滲入，嚴(yán)重影響RNA保護(hù)效果

2.樣品保存

樣品存儲(chǔ)于RNA Keeper中，一般可在4℃穩(wěn)定保存4周。若要在-20℃/-80℃長期保存，需要將樣品浸入RNA Keeper后，4℃放置過夜，使溶液充分滲入到組織中后，再轉(zhuǎn)移至-20℃/-80℃。

3.RNA提取

去除RNA Keeper：組織塊可以直接用滅菌鑷子從RNA Keeper中取出，擠掉多余的RNA Keeper，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體，立即置于裂解液中勻漿。細(xì)胞應(yīng)先離心(>10,000 g，5 min)，收集細(xì)胞沉淀（由于RNA Keeper 密度較大，此時(shí)需要使用大于普通介質(zhì)的離心力）。并用PBS洗滌一次。RNA提取：使用各種常見的RNA抽提試劑盒提取 RNA。

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護(hù)新鮮組織RNA完整性的保存劑(R502）

RNA Keeper-ICE是一種新型試劑，能使冰凍組織解凍并轉(zhuǎn)變到易于勻漿方法處理的狀態(tài)，從而提取高質(zhì)量的RNA。當(dāng)浸沒在RNA Keeper-ICE中的組織從堅(jiān)硬的冰凍狀態(tài)變?nèi)彳浀倪^程中，該溶液可滲入組織，使RNase失活。組織一旦經(jīng)RNA Keeper-ICE溶液處理，就能在室溫下操作而不用擔(dān)心RNA降解。樣品可在常溫下稱重，切割，或者進(jìn)行多種實(shí)驗(yàn)而不影響RNA質(zhì)量。

性能展示

小鼠肝臟冰凍組織經(jīng)過RNA Keeper-ICE解凍后研磨，提取的RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)果表明，28S，18S，5S均清晰可見，說明RNA具有良好的完整性。RNA Keeper-ICE可有效保證RNA完整度的同時(shí)對(duì)冰凍組織進(jìn)行解凍。

操作流程概要

適用范圍

動(dòng)物組織 / 細(xì)胞

組分

操作流程

1.試劑預(yù)處理

將RNA Keeper-ICE于-70℃或-80℃預(yù)冷。

2.冰凍樣品處理

①動(dòng)物組織：按100mg組織比不小于1 ml RNA Keeper-ICE的比例，將冰凍組織浸沒于預(yù)冷的RNA Keeper-ICE中。

△組織塊的厚度應(yīng)不超過0.5cm, 否則會(huì)影響RNA Keeper-ICE的滲透效率，導(dǎo)致RNA穩(wěn)定效果變差。

②培養(yǎng)細(xì)胞、白細(xì)胞：按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法收集細(xì)胞，用PBS清洗后加入至少10倍體積RNA Keeper-ICE，蓋緊管蓋，上下顛倒數(shù)次。此時(shí)沉淀是否被全部懸浮對(duì)實(shí)驗(yàn)無影響。

-20℃存放至少16h后，組織即可進(jìn)行勻漿；若不立即勻漿，組織可繼續(xù)于-20℃穩(wěn)定存放6個(gè)月。

-20℃存放過程中，組織可從RNA Keeper-ICE中取出進(jìn)行室溫切割、稱重等操作，之后繼續(xù)浸潤于RNA Keeper-ICE中-20℃保存。

△組織在室溫暴露時(shí)間不可超過30 min。

3. RNA 提取

將組織取出，用滅菌鑷輕輕擠掉多余的 RNA Keeper-ICE溶液，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體，置于裂解液中立刻勻漿。

△如果是細(xì)胞樣品，10,000g，4℃ 離心 1 min，棄上清，加入裂解液。

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